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急急急，大家帮我看一下这个仪器/试剂是什么
Wash the magnetic protein A/G beads (ratio 1:1) 3x with RIPA buffer (normal). Per
sample use 50 &l protein A and 50 &l protein G in 800 &l RIPA buffer. 这是染色体免疫共沉淀实验的一步，其中magnetic protein A/G beads 是什么东东啊，这是一种试剂吗？如果是试剂，它的作用是什么？具体是怎么操作的？
我是初学者，正在看实验步骤，到这里看不下去了，请求高手指点
就是在magnetic beads外面包被了A/G蛋白，你把抗体和这个混合，温浴，就能结合你的抗体。 : Originally posted by cicelyzh at
就是在magnetic beads外面包被了A/G蛋白，你把抗体和这个混合，温浴，就能结合你的抗体。 那我所能买到的产品是包被了A/G蛋白的magnetic beads，还是两个分开买然后自己操作呢？
另外，看有的实验操作上说，磁珠还要通过一个叫magnetic rack（我翻译为磁道，不知道对不对），这又是个什么东西
还有chip的这一步具体是怎么操作的你能不能跟我大概说一下
谢谢了！ : Originally posted by 你是我的幸福 at
那我所能买到的产品是包被了A/G蛋白的magnetic beads，还是两个分开买然后自己操作呢？
另外，看有的实验操作上说，磁珠还要通过一个叫magnetic rack（我翻译为磁道，不知道对不对），这又是个什么东西
还有chip ... 产品已经包被好A/G蛋白了，直接用。magnetic rack我也不知道怎么翻译，就是把你的结合了样品的magnetic beads放里面，就可以分成上清和beads，起分离作用的。wash, elute每步都用到这个，不过我做IP没用到CHIP。你的抗体在chip上还是样品在chip上？ 谢谢你热心回复！我才开始看实验操作，有很多都看不懂，你说的抗体在chip上还是样品在chip上的问题我还不太懂呢
你能不能帮我看一下这一步具体是什么意思，怎么操作，谢谢啦！
Preclearing the lysat es&&and antibody incubation
& &Always work on ice and keep everything cold. Vortex thoroughly or flip magnetic beads in every step. For incubation of beads use a rotating wheel in a cold room.&&To collect magnetic beads spin down briefly&&(300 g, 30 sec) and use a magnetic rack.&&
1& &Wash&&the magnetic&&protein A/G&&beads&&(ratio&&1:1) 3x with RIPA buffer (normal) .& &Per sample use 50&&&l protein A and 50 &l protein G in 800 &l RIPA buffer.&&
2. Thaw lysates on ice and a dd per 600 &l aliquot :
& && &&&100 &l 1% SDS&&
& && &&&100 &l 1% Na-desoxycholate& &
& && &&&100 &l 1.4&&M NaCl& &
& && &&&100 &l 10% Triton -X-100
3. Transfer the prepared lysates to the washed Protein A/G beads for preclearing .
4. Incubate&&the solution at 4&&°C for&&1 h on a rotating&&wheel. Afterwards , remove&&the
lysate s to a&&fresh tube.
5. Add the&&antibody& &to the lysates and rotate&&over night at 4&&°C. : Originally posted by cicelyzh at
产品已经包被好A/G蛋白了，直接用。magnetic rack我也不知道怎么翻译，就是把你的结合了样品的magnetic beads放里面，就可以分成上清和beads，起分离作用的。wash, elute每步都用到这个，不过我做IP没用到CHIP。你 ... 谢谢你热心回复！我才开始看实验操作，有很多都看不懂，你说的抗体在chip上还是样品在chip上的问题我还不太懂呢
你能不能帮我看一下这一步具体是什么意思，怎么操作，谢谢啦！
Preclearing the lysat es&&and antibody incubation
& &Always work on ice and keep everything cold. Vortex thoroughly or flip magnetic beads in every step. For incubation of beads use a rotating wheel in a cold room.&&To collect magnetic beads spin down briefly&&(300 g, 30 sec) and use a magnetic rack.&&
1& &Wash&&the magnetic&&protein A/G&&beads&&(ratio&&1:1) 3x with RIPA buffer (normal) .& &Per sample use 50&&&l protein A and 50 &l protein G in 800 &l RIPA buffer.&&
2. Thaw lysates on ice and a dd per 600 &l aliquot :
& && &&&100 &l 1% SDS&&
& && &&&100 &l 1% Na-desoxycholate& &
& && &&&100 &l 1.4&&M NaCl& &
& && &&&100 &l 10% Triton -X-100
3. Transfer the prepared lysates to the washed Protein A/G beads for preclearing .
4. Incubate&&the solution at 4&&°C for&&1 h on a rotating&&wheel. Afterwards , remove&&the
lysate s to a&&fresh tube.
5. Add the&&antibody& &to the lysates and rotate&&over night at 4&&°C. : Originally posted by 你是我的幸福 at
谢谢你热心回复！我才开始看实验操作，有很多都看不懂，你说的抗体在chip上还是样品在chip上的问题我还不太懂呢
你能不能帮我看一下这一步具体是什么意思，怎么操作，谢谢啦！
Preclearing the lysat es&&and an ... 这个和我做的差不多，没有chip呀。
就是先活化beads，洗三次，然后加ProteinA/G。
然后处理样品（600ul样品+100ul 1%SDS，100ul Na-desoxycholate, 100ul 1.4M NaCl, 100ul 10% Triton X-100）。
把1ml样品和beads混合，4度1h。
用magnetic rack分离beads和上清。将上清转移到一个新的ep管，加抗体4度过夜形成抗体蛋白复合体。
后面的你没有写，应该是将抗体蛋白复合体与beads混合，4度1h。分离beads和上清。此时beads上是带有抗体蛋白复合体。洗涤。最后加SDS裂解液，把样品从beads上洗脱下来，就可以上SDS-PAGE了。 : Originally posted by cicelyzh at
这个和我做的差不多，没有chip呀。
就是先活化beads，洗三次，然后加ProteinA/G。
然后处理样品（600ul样品+100ul 1%SDS，100ul Na-desoxycholate, 100ul 1.4M NaCl, 100ul 10% Triton X-100）。
把1ml样品和be ... 我这个实验前面还有很多步骤，第一步是先将蛋白质和DNA进行交联的，所以我感觉这个地方得到的应该是beads-抗体-蛋白质-DNA四个的复合体吧。
下一步是这样的：（看起来怎么跟上一步是一样的呢）
6. Wash&&the magnetic&&protein A/G beads&&(ratio&&1:1) 3x with RIPA buffer (normal) . Per sample use 50&&&l protein A and 50 &l protein G in&&800 &l RIPA buffer.&&
7. Add the overnight incubated antibody-lysate s to the&&washed beads and&&incubate&&for&&1 h at 4&&°C on a&&rotating wheel.& &
8. Perform 5 washing steps as follows:
& & 1x 1 ml RIPA buffer (normal)&&
& & 1x 1 ml RIPA buffer (normal)&&
& & 1x 1 ml RIPA buffer (500&&mM NaCl)
& & 1x 1 ml LiCl detergent solution
& & 1x 1 ml 1xTBS&&
9. For elution add 100&&&l SDS/TE (1 % SDS ) to the washed beads and incubate for 10 min at 65 °C. Let cool, centrifuge briefly&&and put on&&the&&magnetic rack. Transfer the supernatant to a new tube.&&
10. For second elution add&&150 &l SDS/TE (0.67 % SDS) to the beads and incubate for
15 min at 65 °C. Let cool, centrifuge briefly and put on magnetic rack. Pool both eluates. : Originally posted by 你是我的幸福 at
我这个实验前面还有很多步骤，第一步是先将蛋白质和DNA进行交联的，所以我感觉这个地方得到的应该是beads-抗体-蛋白质-DNA四个的复合体吧。
下一步是这样的：（看起来怎么跟上一步是一样的呢）
6. Wash&&the mag ... 你下面的步骤和我简述的差不多。就是第8步洗涤的时候不一定要洗那么多次。根据不同抗体的具体情况优化一下实验条件。 : Originally posted by cicelyzh at
这个和我做的差不多，没有chip呀。
就是先活化beads，洗三次，然后加ProteinA/G。
然后处理样品（600ul样品+100ul 1%SDS，100ul Na-desoxycholate, 100ul 1.4M NaCl, 100ul 10% Triton X-100）。
把1ml样品和be ... 这里有一点我不太明白，一开始将样品和磁珠混合，分离出来上清液，加入抗体后过夜（前五步），之后为什么还要再与磁珠混合呢（后六步）？ : Originally posted by 你是我的幸福 at
这里有一点我不太明白，一开始将样品和磁珠混合，分离出来上清液，加入抗体后过夜（前五步），之后为什么还要再与磁珠混合呢（后六步）？... 开始的是非免疫吸附。之后与磁珠混合才是真正吸附你所需的抗原-抗体复合体。 : Originally posted by cicelyzh at
开始的是非免疫吸附。之后与磁珠混合才是真正吸附你所需的抗原-抗体复合体。... 大概明白了，非常感谢！ : Originally posted by cicelyzh at
就是在magnetic beads外面包被了A/G蛋白，你把抗体和这个混合，温浴，就能结合你的抗体。 你好，我看了一段时间的试验指导，现在准备开始了，但是要买很多东西，我想请教你一下，就是那个protein A/G磁珠大概要多少钱，另外magnetic rack你们应该也有用到吧，这个大概要多少钱？
& &如果方便的话，能不能帮我推荐一家销售这种仪器的公司，我在网上看了，没找到。
非常感谢！ : Originally posted by 你是我的幸福 at
你好，我看了一段时间的试验指导，现在准备开始了，但是要买很多东西，我想请教你一下，就是那个protein A/G磁珠大概要多少钱，另外magnetic rack你们应该也有用到吧，这个大概要多少钱？
& &如果方便的话，能不能 ... 这个抱歉啦，我现在人不在国内，不知道行情。 : Originally posted by cicelyzh at
这个抱歉啦，我现在人不在国内，不知道行情。... 那你现在在国外用的是哪个品牌的 magnetic beads我用的是pierce的，还行。magnetic rack是promega的，具体型号忘记了。 : Originally posted by cicelyzh at
开始的是非免疫吸附。之后与磁珠混合才是真正吸附你所需的抗原-抗体复合体。... 有个疑问想请教一下，开始非免疫吸附都吸附掉什么成分呢？是 : Originally posted by 你是我的幸福 at
有个疑问想请教一下，开始非免疫吸附都吸附掉什么成分呢？是... 主要是吸附掉的是和ProteinA/G结合的蛋白，那些非特异性结合的蛋白与你想做的抗原-抗体复合体无关，如果不除去会对后面分析抗体特异性结合的蛋白造成干扰。 : Originally posted by cicelyzh at
主要是吸附掉的是和ProteinA/G结合的蛋白，那些非特异性结合的蛋白与你想做的抗原-抗体复合体无关，如果不除去会对后面分析抗体特异性结合的蛋白造成干扰。... 那在吸附非特异性结合的蛋白的同时，不会把抗原也吸走吗？
还有一个问题，预吸附能把所有其它的非特异性结合的蛋白都吸附干净吗，如果未处理干净，在免疫沉淀时，沉淀下来的除了目的蛋白和抗体复合物，就可能会有其它的蛋白复合物呀. : Originally posted by 你是我的幸福 at
那在吸附非特异性结合的蛋白的同时，不会把抗原也吸走吗？
还有一个问题，预吸附能把所有其它的非特异性结合的蛋白都吸附干净吗，如果未处理干净，在免疫沉淀时，沉淀下来的除了目的蛋白和抗体复合物，就可能会 ... 你的蛋白样品有很多蛋白的，所以不会只结合你的目的蛋白。而且样品蛋白是过量的，经过第一次吸附，一般可以把非特异性吸附位点处理干净，目的是大大降低背景。当然，你做实验的时候还是要做对照的，就可以知道哪些是与抗体特异结合的蛋白，哪些是非特异吸附。
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鱼出问题了？大家帮分析一下。急急急急急急急急急收藏
我的鱼有几条尾巴上出现了几个小白点，有几个大点看上去还好像有些棉絮状的东西，到底怎没回事啊？
1楼 21:52&|
相关的贴子468741123相关的图贴
报下你的水温，换水情况，最好上图
2楼 09:13&|
2种可能~！
按说明操作~！水霉
大约要1星期&&
3楼 14:24&|
回复：2楼水温31 ，两天换一般的水。我觉得好像是细菌。
4楼 08:53&|
回复：4楼不排除
老3样伺候着先~！3天看效果~！ 无效考虑外寄~！
5楼 13:00&|
好的，说的好。
6楼 21:26&|
贴吧贡献榜 登录百度帐号推荐应用
内&&容:使用签名档&&
为兴趣而生，贴吧更懂你。&或数a的4分之3等于数b的5分之4,数a小于数b .（ ）这是一个判断题,_百度作业帮
数a的4分之3等于数b的5分之4,数a小于数b .（ ）这是一个判断题,
错,数a,b都是正数才对,如果数a,b都是负数,就错了!急 急 急！！！请大家帮忙分析一下。。。。。。
共 589 浏览 5 回帖&&
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在线时长: 2 小时
急 急 急！！！请大家帮忙分析一下。。。。。。
我6月6日的月经可是到现在也没有来月经，不过也没有怀孕。这中间用试纸测排卵，也一直没有测到强阳，也说不准排没有排卵。7天之前B超监测说卵泡0.5。。。。唉~！~！
我这是怎么了啊？如果这个月月经还不来，但是也没有好孕，我该怎么办啊？？？？
boboHtml = '';
html += boboH
NTES(".bobo-list").attr("innerHTML", function() {
return this.innerHTML +
}, "utf-8");
发帖: 1 篇
在线时长: 3 小时
LZ放松心情.压力太大了也要导致YJ不调的!!
祝LZ好孕!!
积分: 3211
发帖: 47 篇
在线时长: 376 小时
“7天之前B超监测说卵泡0.5。。。”MM的B超监测太晚了，已经排掉了。如果这个月没有成功，放松心情，下个月继续努力，加油！
网易论坛，天天相伴
There can be miracles，When you believe......
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在线时长: 19 小时
加油，祝你好孕！
发帖: 11 篇
在线时长: 2 小时
引用3楼的发言：
“7天之前B超监测说卵泡0.5。。。”MM的B超监测太晚了，已经排掉了。如果这个月没有成功，放松心情，下个月继续努力，加油！
但是这之前我也有B超检测的。不下于5次啊，都说没有卵泡啊。我的周期38--40天不等的，之前还有3个月没有来月经 唉~！~！看来我是得病了啊！~！
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在线时长: 2 小时
引用4楼的发言：
加油，祝你好孕！
谢谢 你也一样啊 ~！~
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夏秋交季，你有怎样的皮肤护理小妙招，来分享吧。
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下次自动登录求追女孩问题，有发的短信记录，大家帮忙分析一下，在线等，急急急！！！_百度知道
求追女孩问题，有发的短信记录，大家帮忙分析一下，在线等，急急急！！！
她还接受了，她这是拒绝我还是再试探我，这两个月里，还送了她手链，谢谢了：“反正我跟你说明白了，你也清楚了吧”，真的很困惑？我该怎么办啊！，我说有些东西不是自己就能控制的，以后天天发短信聊会，后来我又说了晚安，我想转移话题聊点别的，不过我们又聊了点别的？我还要继续追她吗？麻烦各位了，感觉聊的还不错，我说这是我的真实感受。可昨天发的时候我说我总是想她，我每天都给她发短信，她回复！，她却回复“你要总这么说我就不会短信了”，绝对是每天，包括她们晚上谈论什么啊：“有些东西就是要控制的”，她又回复我和她都是大学生？我还有机会吗，以前也发过这样的短信，在七夕节那我把她约了出来。大家帮帮忙，她却说“别有这个真实感受了”，追她两个多月了
提问者采纳
在一定的范围内你可以各种追，对她多认真，既然手链也收了，你要让他知道你对她多上心。女生一般都会吃这套你放心吧，对她多好很显然是拒绝了！只要没男朋友就好办了。但是追女孩儿真的就该给脸不要脸，死缠烂打，只要别让她讨厌你，那绝对是没有男朋友滴！别太激动弄巧成拙就行，七夕也过了
提问者评价
多谢你的帮忙，我会继续的！
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其他9条回答
如果是试探，循序渐进，树立你在她心里的形象，你所做的这些是远远不够的。希望我的答案对你的问题有帮助，她并不想接受你！通过这么一个过程，也只能很抱歉地告诉你。你要分清楚试探和拒绝的区别。同时我希望你能摆正这一个观点，但是注意千万不要发誓“一辈子朋友”（如果那样我就无奈了……），她拒绝了吧，相信你可以追到她，都是朋友之间的事情，很正常，要追一个人。如果你实在想追她，继续保持你们的短信联络，你应该多约她出去玩，她会在第一条短信以后转移话题，那就是，接受你的手链。同时真诚很重要，让她感觉到你对她有足够的信任，不妨先承认你们之间的朋友关系，至少不会就这这个问题继续走下去、舍得。我认为！这很重要，有意地制造一些浪漫，毕竟你们之间有一定的好感基础，只是把你当做普通朋友看待。特别是 要增进你对她的了解，投其所好。和你聊天，你要搞清楚，但是同时要增加独处的机会。即使再多几个月每天发短信也无济于事！要追就要大胆！，要对她打开自己的心门这个……我不了解你和她的具体情况，但我想既然对方这么说
别追了，你要真的很喜欢她不会问这个问题...要是想追来玩玩，那她可以试探，你也可以欲擒故纵么.....
不追能行么 链子都收了 加大火力 我跟你说 还是火候不够 要用计谋 追女孩用计不算赖皮 从今天开始加大火力 再追一个月 不成功便成仁！！！
拒绝了~~~“反正我跟你说明白了，你也清楚了吧”这句话就可以知道了~~~
晕，说这么明白了，当然是拒绝你了，她只是拿你聊聊天而已，或者她已经有男友了，不排除这种可能，我自己也是女孩子，我想还是有些了解的。 别浪费时间了。以前我们班有个女孩子，她就不喜欢那个男的，但也收了他的礼物，这个和喜欢是两码事。以后别跟她发信息，也别去联系她了，我想这样比较好
追 女生就要死缠烂打希望你成功喽
对于你自己喜欢的那个女生，你了解多少？ 你连她话的意思都看不明白？你连她有没有男朋友你知道吗？你是她与男友争吵之后消遣的对象吗？你如果真的喜欢的话，你先了解对方在说吧。
说实话是拒绝了，我一个好朋友就是你喜欢的人的角色…
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