处女峦,日本幼女性av
友情链接：化合物6r体内外抗肿瘤活性及作用机制研究--《山东大学》2013年硕士论文
化合物6r体内外抗肿瘤活性及作用机制研究
【摘要】：研究背景
依他尼酸(EA)是一种谷胱甘肽转移酶(GSTπ)抑制剂,具有较弱的抗肿瘤活性。但由于EA生物利用度低,副作用大,限制了其在临床的进一步应用。根据生物等电子重排原理,我们设计并合成了一系列EA嗯二唑衍生物,通过筛选,发现化合物5-[2,3-二氯-4-(2-亚甲基-1-代丁基)氯苯]-3-甲基-1,2,4-噁二唑(6r)具有较高的抗肿瘤活性,具有进一步研究成为抗肿瘤药物的价值。
体外实验：MTT法评价化合物6r对一系列肿瘤细胞增殖的抑制作用,并选取敏感细胞株人结肠癌SW620细胞及人前列腺癌PC3细胞进一步研究。Hoechst33258染色法,FITC-AnnexinV/PI双染法检测6r对肿瘤细胞凋亡的影响；碘化丙啶(PI)单染法检测6r对肿瘤细胞周期的影响。Western blotting法检测6r对肿瘤细胞中GST71, EGFR, PI3K/Akt信号通路分子及周期蛋白Cyclin D1表达水平的影响。
体内实验：分别构建裸鼠皮下接种结肠癌SW620细胞移植瘤,皮下接种前列腺癌PC3细胞移植瘤以及原位接种标靶荧光素酶基因前列腺癌PC-3M-Luc-C6细胞移植瘤模型,以6r治疗组,5-氟尿嘧啶(5-Fu)或米托蒽醌(Mitoxantrone, MA)阳性对照组及溶剂阴性对照组进行裸鼠实验。采用尾静脉方式给药,隔天给药并连续给药数周。实验结束后,处死裸鼠,取出肿瘤并称重,通过与阴性对照组比较评价6r体内抗肿瘤活性。Western blotting法检测6r对肿瘤组织中GSTπ,凋亡相关蛋白Caspase-3, bcl-2/Bax, Cyt-C及EGFR/PI3K/Akt表达的影响
体外实验结果：体外生长抑制试验结果表明,6r对大多数肿瘤细胞具有较强的抑制作用,对SW620及PC3肿瘤细胞半抑制率IC50分别为4.89μM和3.79μM,选取敏感肿瘤细胞株PC3及SW620进一步实验。Hoechst33258染色结果显示,2μM,4μM6r可明显诱导肿瘤细胞凋亡。荧光显微镜观察,SW620及PC3细胞核染色质浓染,固缩或聚核膜周边,或呈块状碎裂改变。FITC-AnnexinV/PI双染法试验结果表明,4μM6r处理SW620及PC3肿瘤细胞24h凋亡率分别为28.8%和29.41%。PI单染法实验结果表明,4μM6r处理SW620细胞,处于S期的细胞数比例显著增加至66.85%；8μM6r处理PC3细胞,处于S期的细胞数比例显著增加至22.79%,证明6r可阻滞肿瘤细胞周期于S期。Western blotting结果显示,6r对SW620细胞及肿瘤组织中GSTπ的表达无明显影响,8μM6r可显著增加抑制PC3细胞中EGFR/PI3K/Akt及Cyclin D1的表达水平。
体内实验结果：裸鼠移植瘤实验中,与阴性对照组比较,以8mg/kg剂量尾静脉注射给药3周后,6r对结肠癌SW620皮下移植瘤生长抑制率为44.17%；给药3周后,6r对前列腺癌PC3皮下移植瘤的生长抑制率为63.3%；给药4周后,对原位前列腺癌PC-3M细胞移植瘤抑制率为60.5%,且无明显副作用。动物实验结果证明6r具有较强的体内抗肿瘤活性。Western bolotting结果显示,6r对SW620肿瘤组织中GSTπ的表达无明显影响。6r可显著增加裸鼠肿瘤组织中cleaved-caspase-3的表达水平,促进线粒体内细胞色素C的释放,增加Bax的表达而下调bcl-2的表达,使两者比例降低,抑制EGFR/PI3K/Akt蛋白的表达。
化合物6r具有较强的体内外抗肿瘤活性,其可能的作用机制是通过靶向EGFR,抑制EGFR的表达及PI3K/Akt信号通路,通过bcl-2/Bax-Cyt-C-caspase-3线粒体介导的凋亡通路诱导肿瘤细胞凋亡。同时,6r通过下调周期蛋白Cyclin D1的表达,阻滞肿瘤细胞周期于S期,抑制肿瘤细胞的增殖。因此,6r有潜力成为抗癌的候选药物之一。
【关键词】：
【学位授予单位】：山东大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2013【分类号】：R730.53【目录】：
中文摘要10-13ABSTRACT13-16符号说明16-18前言18-26 1 表皮生长因子受体19-22
1.1 EGFR的表达与分子结构的特点19
1.2 EGFR的配体及信号传导19-21
1.3 EGFR激活的相关信号传导通路21-22 2 表皮生长因子受体与肿瘤的相关性22-24
2.1 EGFR的表达22-23
2.2 EGFR的自分泌作用23
2.3 EGFR与肿瘤的血管生成23-24
2.4 EGFR与肿瘤的治疗24 3 EA噁二唑杂环衍生物24-26第一部分 6r诱导结肠癌SW620细胞凋亡26-44 1 实验材料26-28
1.1 化合物26
1.2 细胞株26
1.3 实验动物26
1.4 试剂26-28
1.5 仪器设备28 2 实验方法28-31
2.1 肿瘤细胞生长抑制试验28-29
2.2 6r对裸鼠皮下接种人结肠癌SW620细胞生长抑制试验29
2.3 Hoechst 33258染色法检测SW620细胞凋亡试验29-30
2.4 FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡试验30
2.5 流式细胞术检测SW620细胞周期试验30
2.6 Western blotting法检测GSTπ及凋亡相关蛋白表达试验30-31
2.7 统计学方法31 3 实验结果31-40
3.1 6r对肿瘤细胞生长抑制作用31-32
3.2 6r对接种结肠癌细胞株SW620裸鼠的生长抑制作用32-34
3.3 Hoechst 33258染色检测6r诱导SW620细胞凋亡作用34-35
3.4 6r对SW620细胞凋亡率的影响35-36
3.5 6r对SW620细胞及肿瘤组织中GSTπ的表达无影响36-38
3.6 6r调控SW620肿瘤细胞凋亡相关蛋白的表达38-39
3.7 6r对SW620细胞周期的影响39-40 4 讨论40-43 5 结论43-44第二部分 6r靶向EGFR诱导前列腺癌PC3细胞凋亡44-64 1 实验材料44-45
1.1 化合物44
1.2 细胞株44
1.3 实验动物44
1.4 试剂44-45
1.5 仪器设备45 2 实验方法45-49
2.1 细胞培养45-46
2.2 6r对体外细胞生长抑制试验46
2.3 6r对裸鼠皮下接种前列腺癌PC3细胞生长抑制试验46-47
2.4 6r对裸鼠原位接种前列腺癌PC-3M-Luc-C6细胞生长抑制试验47
2.5 Hoechst 33258染色法检测6r对PC3细胞凋亡的影响47
2.6 FITC-Annexin V/PI双染法测定细胞凋亡率47-48
2.7 6r对PC3细胞周期的影响试验48
2.8 Western blotting法检测EGFR及凋亡相关蛋白表达48-49
2.9 统计学方法49 3 实验结果49-61
3.1 6r对体外PC3细胞生长的抑制作用49-50
3.2 6r对裸鼠皮下接种PC3肿瘤的生长抑制作用50-51
3.3 6r对原位接种PC-3M-Luc-C6肿瘤裸鼠的生长抑制作用51-54
3.4 Hoechst 33258染色法观察6r诱导PC3细胞凋亡作用54-55
3.5 FITC-Annexin V/PI双染法观察6r对PC3细胞凋亡率的影响55-56
3.6 6r调控PC3肿瘤细胞凋亡相关蛋白的表达56-57
3.7 6r抑制PC3细胞及PC-3M肿瘤组织中EGFR的表达57-59
3.8 6r对PC3细胞增殖周期的影响59-61 4 讨论61-63 5 结论63-64参考文献64-72致谢72-73硕士学位期间发表或待发表的论文73-74附件74
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他就是王若尧南京中考“裸分”第一名
08:29 &　　“今年南京中考第一名718分里有5分的加分，而王若尧的716分是"裸考"第一名！”记者昨天在南京29中见到了南京今年中考“裸分”第一名王若尧，他的各学科成绩加起来是南京市最高分：语文107分，数学118分，英语115分，政治56分，物理100分、化学80分、历史60分、生物20分、地理20分、体育40分均为满分。有趣的是，记者发现，这个阳光大男孩身上有不少家长认为的“坏习惯”。但细细想想，这些“坏习惯”真的是“坏习惯”吗？　　“坏习惯”1：　　“拖拉大王”，做作业全班最慢　　别看王若尧分数考得高，但是做作业的速度却比一般人慢了很多，班主任赵成梅曾经专门调查过孩子们做作业的情况，结果大多数同学都是八九点就能完成作业，而“拖拉大王”王若尧几乎是全班最慢的，可能需要10点才能完成。“很多家长都会觉得孩子做作业慢是个坏习惯，我们老师的常规思维也是这样，但王若尧改变了我的看法，我发现这成了他学习的一个特色，他喜欢一边做一边思考以便复习，功课做完了一天在学校的复习也完成了。”同样的学习方法和思维也贯穿到了王若尧对数学的学习中。“我认为做数学就是要沉下心，细心做，我一般都上课认真听，不上补习班。像奥数就是另外一种学习方式，它强调思维和逻辑性。”出人意料的是，王若尧并没有刻意进行过奥数培训，关于取得高分数，王若尧表示平衡和全面最重要。　　“坏习惯”2：　　被戏称“大婶”，因为爱管闲事　　作为初三（1）班的团支部书记，王若尧在班上是出了名的热心和爱管闲事。“他很热情，什么都能干，我们都喊他大婶呢。”在采访中，同班女生这样评价王若尧。班上哪个同学有困难、哪些活动需要人牵头组织、哪些事情需要花费课后时间做，王若尧总是当仁不让往自己身上揽。“很多家长就希望自己的孩子把全部精力都花在学习上，怕孩子分心影响学习，而王若尧不是这样，不仅成绩好，还很善解人意，懂得感恩，这样的孩子其实更加全面。”赵老师表示。　　“坏习惯”3：　　太爱玩，中考前打篮球摔断手腕　　这个1995年出生的男孩非常爱玩，是班里的“全能王”，主持、唱歌、篮球、跑步每一样都不逊色。“他体育很好，参加运动会从来都是第一名。”从初一开始，王若尧就养成了和爸爸一起跑步的习惯，每周两三次的运动量锻炼了他的体格，平时的篮球场上常常能看到他活跃的身影，中考前也不落，结果在一次篮球运动中摔伤了右手手腕，而中考的体育测试迫在眉睫。“作业只能选择性做喽，有2天完全写不了，体育考试运球也是用的左手。”面对这个突如其来的小插曲，王若尧显得很淡定，平时深厚的功底帮助他体育得到了满分，不过，这次意外还是影响了他一模考试的发挥，重新整理后，王若尧在二模考试中又拿回了第一。　　“坏习惯”4：　　“擅作主张”，主动放弃公费留学　　中考成绩出来当天，王若尧凭借716分的南京今年中考“裸分”第一的好成绩，获得了教育部门给予的公费选送前往新加坡留学的机会，不过出人意料的是，这样的好机会他直接放弃了。“我希望能留在南京，在对自己的未来选择上我还是比较"主观"的，不属于听话的孩子，但是爸爸妈妈一直很尊重我的选择，很快就决定放弃了。”王若尧说他们家的环境很宽松自由，爸妈也习惯了不会强制干预他的决定。　　[最新中考信息]　　名校纷纷“开屏”　　晒中考漂亮成绩单　　今年南京市各所热门初中中考情况如何？很多家长纷纷打来晨报热线询问，想以此作为今后小升初的参考。记者昨天了解到，一批名校都交出了漂亮的成绩单。　　南京市中考前20名学生中树人学校有7位同学，最高分黄一泓同学712分，700分以上学生20人，690分以上83人，680分以上167人，达到南师大附中统招分数线684分以上的有132位同学。2008级“中学整体教育实验班”40位同学，32位同学达到南师大附中录取线。　　南京29中初三（1）班51个人，平均分679.84分，已经超过了金陵中学的模拟投档线。而这个班包括王若尧在内有7名学生获得700分以上的高分，690分以上的高分人数达15人。男生冒昕睿考了711分，是南京第7名。考702分的赵恺宁是班级的团支部副书记，英语口语竞赛得过南京市和江苏省的一等奖。　　南京市新城初中学区生“零拒绝”的条件下再次取得中考好成绩，15人超过南师大附中录取线，31人达到附中扩招线，报考附中22人实际录取18人。　　秦淮外校在全市高分段人数大幅减少的情况下，高分段人数稳步提升，均分在全区遥遥领先，前十名中有七名在该校。全区690分以上的人该校占三分之二，100多人中考成绩超过四大名校录取分数线。学校中考总均分612.6分，比市均分539.7分高出72.9分。陈思聪和蔡纾暄两位同学参加南京外国语学校高一新生考试分别取得了796分和780分的好成绩，高出南外录取分数线42分和26分。 记者 刘颖(责任编辑：Newshoo)(9) | (0) | 收藏 (0) |
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