定 的BAMH1 的酶切试剂不能进行酶切是什么原因 ?
bczqyly568
如果担心酶的功能不行,先找个阳性对照切切看,例如lamda HindIII的marker什么的,看能不能切出不一样的条带.或者是实验室别人构建好带有BamHI位点的质粒.这些验证了不行,就把结果提供给厂家,可能是酶失效了.但是如果切这些没有问题,是切你的质粒,或者PCR的片段不行的话,最好需要严格优化条件,例如根据DNA的模板量确定应该使用的酶切的体系,酶的用量等信息.
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扫描下载二维码下图(一)为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，amp R_百度知道
下图(一)为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，amp R
图()某基工程利用质粒筒图箭所指别限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点amp R 青霉素(抗素)抗性基tct R 四环素(抗素)抗性基P启T终止ori复制原点已知目基两端别包括EcoRⅠ、BamHⅠ内种酶酶切位点图(二)几种酶作用于基位置请答列问题：
(1)基工程用工具三种：用作切取目基_________酶；二目基与运载体拼接_________酶；三作运载体质粒(2)含目基DNA与经特定酶切载体(质粒)进行拼接形重组DNA理论讲重组DNA能____________、____________、___________三种其效(所需要)基表达载体____________需要些拼接产物进行离提纯(3)利用图()所示质粒拼接形3种拼接产物(基表达载体)与任何抗药性原核宿主细胞接种含四环素培养基能原核宿主细胞所含拼接产物(基表达载体)_______(4)效基表达载体功导入受体细胞进行表达首先需要进行转录RNA聚合酶识别结合位点图()________物基工程基表达载体导入受体细胞用________植物基工程基表达载体导入受体细胞用_________种微物容易侵染_________Ti质粒_________转移受体细胞染色体DNA(5)基工程作用于图(二)所示a位置酶____________；作用于b位置酶____________
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(1)限制(限制性核酸内切酶)&&&& &DNA连接(2)目―目基& 目基―运载体&& 运载体―运载体&& 目基―载体(3)运载体―运载体目基―运载体(4)P(启)&&&& &显微注射&& &农杆菌转化&& &双叶植物裸植物&&&& &T-DNA(5)限制酶(限制性内切酶)&&&&&& DNA解旋酶
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双酶切没出现目的条带，呈弥散型，有图，求助。
切了三个小时，用的是takara的酶，Bamh1和Ecor1，buffer同一个，Ecor1的相对活性比较低，只要40。
是质粒。。质粒电泳跑出来的条带可以的。。没什么问题
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关于双酶切和通用buffer的问题
我设计了1对引物并加了酶切位点（EcoR1，&&BamH1）但是我查了takara商品目录那本书，两个酶切位点的buffer是不一样的，分别是H和K。但是百度搜素的takara双酶切表可以用1×K buffer,请问我是分步酶切还是用1×K buffer同时酶切，实验室没有师兄师姐，没人可以问，求指教。
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